本文標(biāo)題："免疫過氧化酶染色法-使用光學(xué)顯微鏡觀察"
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免疫過氧化酶染色法
在室溫或在4°C恒濕機內(nèi)完成孵育。每一步驟完成后請將試劑汲除, 但是避免在每一步驟的過程中間讓試樣變亁。
請使用足量的試劑覆蓋試樣(通常為20到50 mL)。
使用10%正常山羊血清(Normal Goat Serum, Calbiochem目錄編號NS02L)孵育20分鐘以抑制免疫球蛋白的非特定結(jié)合現(xiàn)象。
在PBS中進(jìn)行清洗, 更換3次且每次進(jìn)行15分鐘。
在室溫條件下或者在4°C條件下(隔夜進(jìn)行), 使用含有1% BSA的PBS溶液孵育初級抗體60分鐘。福馬林固定和石臘包埋切片建議使用隔夜孵育的方法。特定應(yīng)用的最佳抗體濃度應(yīng)使用低定法測定; 起始濃度在物質(zhì)資料表中有給定。
在PBS中進(jìn)行潤洗, 更換3次且每次進(jìn)行5分鐘。
在PBS溶液中使用和合適生物素複合的第二步驟抗體孵育45分鐘。特定應(yīng)用的最佳抗體濃度應(yīng)使用低定法測定; 起始濃度在物質(zhì)資料表中有給定。
在PBS中進(jìn)行潤洗, 更換3次且每次進(jìn)行5分鐘。
在含有卵白素辣根過氧化酶 (目錄編號 OR03L)的PBS溶液中孵育15分鐘。特定應(yīng)用的卵白素複合體濃度應(yīng)使用滴定法測定; 建議起始濃度在物質(zhì)資料表中有給定。
使用PBS溶液廣泛清洗。
在 TRITON®-PBS溶液中潤洗30秒。
在DAB溶液中孵育5分鐘。然后使用顯微鏡監(jiān)測。若需要進(jìn)一步強化染色結(jié)果, 請重新置入DAB溶液中多孵育1到5分鐘。
在蒸餾水中進(jìn)行潤洗。
若有需要請在蘇木紫溶液中進(jìn)行對比染色1到3分鐘。
利用酒精和二甲苯去水合。
使用光學(xué)顯微鏡觀察。
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